RNA採取キット Oragene®·RNAOragene® is a trademark of DNA Genotek Inc, Canada

Oragene® is a trademark of DNA Genotek Inc, Canada

写真:RNA採取キット Oragene(オラジーン)

発現解析用RNA採取キットOragene・RNA は唾液中に含まれる細胞由来のRNAを採取・保存するキットです。一般的には血液や生体組織検査、手術による摘出組織などが主なヒトRNAサンプル源ですが、これら従来の採取方法は容易ではなく、採取、保存、輸送など様々な段階において課題を抱えています。
それに代わり、Oragene・RNAは唾液中に含まれる細胞をサンプル源としています。本キットは容易に利用でき、ドナーに非侵襲的な採取方法であり、かつ保存、輸送にも適しています。
Oragene・RNA容器にドナーが2ml の唾液を入れ付属のキャップを閉めると、唾液と保存溶液が混合し、室温で保存することができます。ドナーに非侵襲的なサンプル採取方法、技術は注目を集めており、ドナーによる研究への協力を得やすくし、RNA 採取プロセスのコスト削減にも貢献いたします。

RNA源は白血球細胞と口腔内上皮細胞です。
唾液サンプルで目的遺伝子が解析可能か一度商品サンプルで確認することをお勧めしています。

*本キットは研究用試薬です。

RNA採取キット Oragene®・RNAの特徴

  • 唾液2mlより高品質トータルRNA採取可能です。(A260/A280 >1.8)
  • 最長60日間室温で精製前のRNA保存が可能です。
  • キット化されているので検体の自己採取・輸送も容易です。
  • 遠方の検体採取にもお勧めです!
  • 検体提供者の協力も得られやすくなり、コスト削減にもつながります!
  • mRNA発現プロファイリング、miRNA(マイクロRNA)、疾病の発現サイン研究に。
  • リアルタイムPCRに対応しています。

RNA採取方法の比較

  血液採取 Oragene RNA A社 B社
室温でのRNA安定性 3日間 60日間 14日間 30日間
サンプルの自己採取 ×
サンプル輸送が容易 ×
低感染リスク ×
トータルRNA量 ※>600 RT-PCR/ml血液 ※>320 RT-PCR/ml唾液 様々 -
A260/A280 1.8-2.2 >1.8 - -
準備所要時間 90分 50分 - -
リアルタイムPCR

RNA採取キット Oragene®・RNA

Step1 唾液を採取

以下の1~5の手順に従って唾液サンプルを採取するのに約2~5分を要します。

遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)でのRNA採取方法01

(1)下図に示してある位置(本体にはFILL TOと表示)まで唾液を入れます。(泡は唾液量として見なしません。)

遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)でのRNA採取方法02

(2)容器を垂直に持ち、保存溶液入り漏斗キャップを閉めます。閉めると保存溶液と唾液が混ざります。

遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)でのRNA採取方法03

(3)容器を垂直に持ち、漏斗をチューブから外します。

遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)でのRNA採取方法04

(4)小キャップでチューブをしっかりと閉じます。

遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)でのRNA採取方法05

(5)軽く5秒間程度攪拌します。

市販の精製溶液を使用し精製します。

Step2 検体を保存する

Oragene・RNAは採取した唾液を、室温(15~30℃)で約8週間保存することが可能です。

ここではOragene・RNA を使用し採取した唾液 検体を8 週間まで室温保存したときのRNA の質、量、安定性について評価した結果を示します。

評価にあたって、唾液検体はOragene・RNAのプロトコルに従って採取、精製しました。精製したRNA を1%アガロースゲルにて電気泳動しバンドの強さを確かめました。また少量のサンプルからトータルRNA量を測量し、純度は260nm、280nm、230nm吸光度にて評価しました。吸光度値はサンプルの濁度による訂正をA260、A280値からA320値を差し引き測定しました。さらにInvitrogen Random Primersを使用しInvitrogenM-MLV Reverse Transcriptase のプロトコールに沿ってcDNA を調整しました。リアルタイムPCRはCorbett Rotorgene RG-3000Aにて行い、1回の25ul PCR反応あたり1/100 cDNAを使用しています。

評価結果

Oragene・RNAで採取して唾液検体からのRNA収量について
表:遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)によるリアルタイムPCR
表1:OrageneRNAで採取した検体からのRNA収量と純度

表1ではドナー16人から得られた唾液をもとに、RNA収量と純度を評価しました。唾液2ml からのトータルRNA 採取量は平均23.4ug でA260/A280 は1.9となりました。

室温保存での安定性の評価(電気泳動)
表:遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)によるリアルタイムPCR
図1:Oragene・RNAで採取した唾液検体を室温で3日間、8週間保存し、精製したrRNAを電気泳動した結果

次に、Oragene・RNAで採取した唾液を室温で3日間、8週間保存し、室温保存の安定性について評価しました。得られたRNAをアガロースゲル電気泳動のバンドの強さ、またヒトmRNA プローブ(ribosomal 18S、β-actin、β-actin、β-2-microglobulin、Interleukin-8 及びHistatin-3)によるリアルタイムPCR により評価しました(図1)。電気泳動の結果よりrRNAのバンド は室温で8週間保存しても影響がないことが分かりました。

室温保存での安定性の評価(RT-PCR)
表:遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)によるリアルタイムPCR
図2:Oragene・RNA/唾液5サンプルを精製前に室温で1週間(実線)、8週間(点線)保存したものをヒト18S rRNA プライマーを用いてリアルタイムPCRした。培養HCT116細胞由来のRNA をポジティブコントロールとして使用。

室温で保存したOragene・RNAから得られたRNAの安定性をリアルタイムPCRで評価しました。データ(図2、表2)ではCt 値がわずかにしか変動していないことから、Oragene・RNAによってRNAが8週間安定的に保存されたことが示されています。

表:遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)によるリアルタイムPCR
表2:ヒト18S rRNAとβ-actin mRNAのリアルタイムPCR Ct値

またリアルタイムPCR シグナルで測定した5 種類(ヒト18S rRNA, β-actin、β-2 microglobulin、Interleukin-8、及びHistatin-3)のCt値は±2以内の変動でした。(図3)
RNAは60日間室温保存しても安定した状態で保たれています。

表:遺伝子解析用RNA採取キットOragene・RNA(オラジーン)によるリアルタイムPCR

図3: 5 種類の遺伝子のCt 値の結果。8 検体の唾液RNA サンプルを最大8週間まで保存し、各段階で精製。
リアルタイムPCRを用い5種類の遺伝子について解析。各段階におけるCt値とサンプル採取後すぐに精製したときのCt値と比較したグラフ。赤線は全検体の平均Ct値。

Step3 検体を精製する

Step4 参考文献

姉妹品

写真:DNA採取キット Oragene(オラジーン)

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製品カテゴリ2 RNA
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サムネイル画像 RNA採取キット Oragene®·RNA
説明文 唾液からRNAを採取、保存するキットです。室温で約60日保存が可能です。
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